Биология - Метод локальной фиксации потенциала - Planar patch-clamp

09 февраля 2011


Оглавление:
1. Метод локальной фиксации потенциала
2. Задача: исследование трансмембранных ионных токов
3. Методики изучения электрических свойств клеточной мембраны
4. Решение: patch-clamp, его варианты и конфигурации
5. Примеры записей, получаемых методом patch-clamp
6. Planar patch-clamp



Port-a-Patch= измерительний прибор, насос, усилитель, компьютер. планарное сооружение помещается на стол.

Это метод, разработанный для увеличения производительности в электрофизиологии, когда требуются массовые измерения трансмембранной проводимости. В частности, этот метод находит применение в фармакологических исследованиях. Если при классическом patch-clamp пипетка позиционируется на неподвижной клетке, то при планарном, напротив, клеточная суспензия наносится на микрочип с упорядоченными отверстиями субклеточного диаметра. Клетка оседает на отверстие, с помощью насоса подсасывается к нему, в результате чего формируется гигаомный контакт. Далее исследование проводится по тому же принципу, что и в традиционном patch-clamp.

Основное преимущество планарного patch-clamp состоит в том, что эксперимент выполняется значительно проще, требует меньшей квалификации от исследователя и занимает меньше времени. Достаточно много измерений может быть выполнено одно за другим в автоматическом режиме. По утверждению авторов методики, этот метод позволяет легче осуществлять перфузию внутриклеточного содержимого, а также более точно дозировать исследуемые или тестовые фармакологические вещества. С помощью этого метода относительно легко работать с клетками, обычно находящимися во взвешенном состоянии — в частности, с клетками крови.

Вместе с тем, метод планарного patch-clamp имеет ряд существенных ограничений. Основное состоит в том, что исследуемые клетки должны находиться в суспензии. Соответственно, не существует возможности работать с фрагментами ткани, невозможно изучать взаимодействие клеток друг с другом. Для мобилизации клеток необходимо использовать ферменты-протеазы, которые могут модифицировать поведение изучаемых ионных каналов.

Все вышесказанное приводит к тому, что планарный patch-clamp находит применение главным образом в фармакологических скрининговых исследованиях, где требуются массовые измерения, но не столь распространен в области фундаментальной науки.



Просмотров: 13581


<<< Метод доминантных летальных мутаций у Drosophila melanogaster