Биология - Микоплазмы - Определение микоплазм в лаборатории
08 февраля 2011Оглавление:
1. Микоплазмы
2. Экология
3. Определение микоплазм в лаборатории
4. Вызываемые заболевания
Методы определения микоплазм разделяют на две группы — культуральные и альтернативные. Культуральные методы основаны на культивировании образцов биологического материала, в котором проверяется наличие микоплазм, в селективных жидких и с добавлением агара питательных средах в аэробных и анаэробных условиях.
Альтернативные методы основаны на полимеразной цепной реакции, гибридизации рРНК микоплазм с флуоресцентно-меченными зондами и определении активности ферментов метаболизма микоплазм.
Среды для культивирования микоплазм
Микоплазмы являются требовательными микроорганизмами. Культивируют микоплазмы на специальных элективных бульонных средах.
Среды для микоплазм содержит различные экстракты и пептоны, хлорид натрия, агар пониженной концентрации. Так, экстракт мяса крупного рогатого скота, панкреатический гидролизат сердца крупного рогатого скота и казеина предоставляют источники азота, углерода, витамины и аминокислоты, а также являются источниками углерода. Хлорид натрия поддерживает осмотический баланс в среде. Агар пониженной концентрации обеспечивает формирование наибольших колоний. Микоплазмы растут в толщу агара, образуя колонии сферической формы, которые рассматривают при малых увеличениях микроскопа на чашках Петри или в рассеянном свете в пробирках с полужидкими агаровыми столбиками.
Кроме того, для культивирования микоплазм в селективные среды добавляют обогащающие добавки, такие как дрожжевой экстракт и лошадиная сыворотка. Дрожжевой экстракт является источником предшественников нуклеиновых кислот, а лошадиная сыворотка — источником холестерина, стимулирующего рост микоплазм.
Прикладные аспекты определения микоплазм
Для экспресс контроля микоплазм в медицинских контрольных лабораториях используют в основном ПЦР с универсальных праймеров на гены 23S и 16S рРНК микоплазм, которые имеют высокую степень гомологии среди различных видов микоплазм. Для более тщательного изучения и полной характеристики образца используются культуральный метод в сочетании с методом цитоиммунофлуоресцентной микроскопии или/и методом индикаторной культуры.
Следует отметить, что стандартным методом определения микоплазм в препаратах, которые используются в терапевтических целях является сочетание культурального метода и метода индикаторной культуры, а ПЦР до сих пор не согласован как «стандарт». По мнению некоторых специалистов, это связано с невозможностью анализировать пробы большого объёма методом ПЦР, в котором объём пробы порядка микролитров, в то время как культуральным методом совместно с методом индикаторной культуры возможно провести анализ больших объёмов порядка миллилитров. Использование большого объёма обуславливается соображениями чувствительности метода при характеристике партии препарата.
Просмотров: 12457
|
|