Биология - Вестерн блоттинг - Блокирование
09 февраля 2011Оглавление:
1. Вестерн блоттинг
2. Подготовка образца
3. Гель-электрофорез
4. Перенос на мембрану
5. Блокирование
6. Детекция
7. Анализ
8. Протоколы
Как только выбрана мембрана за её способность связывать белки, выбраны антитела и целевой белок, должны быть приняты меры по исключению взаимодействия между мембраной и антителом, используемым для детекции целевого белка. Блокирование неспецифичных связываний достигается помещение мембраны в разбавленный раствор белка — обычно бычий сывороточный альбумин или нежирное сухое молоко, с небольшим процентом детергента типа Tween 20. Белок из разбавленного раствора прикрепляется к мембране во всех местах, где не прикрепился целевой белок. Поэтому, при добавлении антител, им нет свободного места на мембране, куда бы они могли прикрепиться, кроме сайтов связывания на специфичных целевых белках. Этот фоновый «шум» в окончательном продукте вестерн блота приводит к чистым результатам и исключению ложно-положительных.
Просмотров: 20433
|
|